生物素，也稱為維生素 B7，是可通過被稱為生物素化的過程在翻譯后添加到蛋白質(zhì)的化學(xué)基團(tuán)。生物素化蛋白和肽非常緊密地與親和素基團(tuán)結(jié)合。可使用化學(xué)或酶方法實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)靶標(biāo)的生物素化。

PTMScan? 技術(shù)采用 Cell Signaling Technology (CST) 的專有方法通過免疫沉淀實(shí)現(xiàn)肽富集，這種方法使用一種特殊微珠接合抗體以及液相色譜法 (LC)-質(zhì)譜法 (MS/MS) 對(duì)細(xì)胞蛋白中的翻譯后修飾 (PTM) 位點(diǎn)進(jìn)行定量分析。這包括磷酸化 (PhosphoScan?)、泛素化 (UbiScan?)、乙酰化 (AcetylScan?) 和甲基化 (MethylScan?) 等等。PTMScan? 技術(shù)能讓研究人員分離、鑒定以及定量大量翻譯后修飾的細(xì)胞肽，具有高特異性和靈敏度，從而可以全面了解細(xì)胞和組織樣品中的 PTM，對(duì)這些修飾位點(diǎn)發(fā)生于何處不會(huì)具有偏好性 (1)。如需了解更多有關(guān) PTMScan? 蛋白質(zhì)組服務(wù)的信息，請(qǐng)?jiān)L問 www.cellsignal.com/services/index.html。

蛋白質(zhì)和肽的生物素化已使用多年，已成為用生化方式標(biāo)記感興趣的靶標(biāo)的常用方法（1）。一個(gè)優(yōu)勢(shì)是與親和素的結(jié)合作用非常強(qiáng)，其可用于純化生物素化的蛋白（2,3）。它還可以作為各種測(cè)定法和工具中偶聯(lián)各種標(biāo)簽（例如染料、微珠和其他固體底物）的方法（4,5）。

已開發(fā)出了新的測(cè)定法，以增進(jìn)對(duì)于蛋白質(zhì)亞細(xì)胞背景、定位和蛋白-蛋白相互作用的闡釋。這些新的細(xì)胞測(cè)定法使用生物素連接酶或工程化的抗壞血酸過氧化物酶 (Apex) 融合蛋白，這些蛋白能夠使特定細(xì)胞區(qū)室內(nèi)的蛋白質(zhì)靶標(biāo)附近生物素化。這類生物素鄰位測(cè)定法可提供有關(guān)亞細(xì)胞定位、多亞單位組分以及招募未知靶標(biāo)的升級(jí)信息。使用 CST 內(nèi)部開發(fā)的抗生物素兔單克隆抗體；我們已經(jīng)開發(fā)出一種使用 CST 專有 PTMScan(r) 方案首先進(jìn)行免疫親和富集然后進(jìn)行質(zhì)譜分析的耐用程序。這樣能夠識(shí)別生物素化靶標(biāo)和調(diào)查新蛋白質(zhì)的作用。這種測(cè)定法為這些類型的生物素臨位測(cè)定法（例如 APEX（6,7）) 工程細(xì)胞系統(tǒng)和其他相關(guān)方法）提供了豐富的數(shù)據(jù)。

1. Alderton, G. et al. (1945) Science 101, 151-2.
2. Wright, L.D. et al. (1947) Proc Soc Exp Biol Med 64, 150-3.
3. Cronan, J.E. (1990) J Biol Chem 265, 10327-33.
4. Hofmann, K. and Kiso, Y. (1976) Proc Natl Acad Sci U S A 73, 3516-8.
5. Shamsuddin, A.M. and Harris, C.C. (1983) Arch Pathol Lab Med 107, 514-7.
6. Paek, J. et al. (2017) Cell 169, 338-349.e11.
7. Hung, V. et al. (2016) Nat Protoc 11, 456-75.